+7 (3822) 609-826
Окрашивание бактерий по Граму
зафиксируй свои знания!
Исторический момент
или что такое Г+ и Г-
Метод окрашивания бактерий по Граму был предложен в 1884 году датским ученым Х. Грамом. К грамотрицательным бактериям, в частности, относятся кишечные палочки, сальмонеллы, бруцеллы, возбудители дизентерии, холеры, уксуснокислые бактерии, семейство Псевдомонадовые (Pseudomonadaceae)
Основы метода
Метод окрашивания бактерий по Граму основан на различной способности микроорганизмов удерживать в клетке красители трифенилметанового ряда – кристаллический фиолетовый или генциановый фиолетовый. Сущность метода основана на различии в химическом составе и строении клеточной стенки бактерий.
Как уже было указано, все бактерии по этому признаку делят на две группы:
грамположительные – красящиеся по Граму;
грамотрицательные – не красящиеся по Граму
Как уже было указано, все бактерии по этому признаку делят на две группы:
грамположительные – красящиеся по Граму;
грамотрицательные – не красящиеся по Граму
Методика окрашивания
этап за этапом
Подготовка микробиологического мазка
На обезжиренное предметное стекло наносят в трех местах три капли воды и готовят три тонких мазка различных видовбактерий. При этом по краям располагают контрольные мазки с заведомо известным отношением к окраске по Граму. В центре – мазок исследуемой культуры
Фиксация микробиологического мазка
Мазок фиксируют на зажженной спиртовке, пронося его в конце трижды через пламя
Генцианвиолент
Мазок окрашивают в течение одной минуты генцианвиолентом. Для этого на предметное стекло кладут полоску фильтровальной бумаги, и сверху наносят несколько капель красителя
Раствор Люголя
Бумажку с красителем удаляют, на препарат наносят раствор Люголя (водой промывать не надо) и выдерживают 60 секунд, до полного почернения мазка. Не промывая водой, препарат обрабатывают 96% спиртом в течение 15–20 с. При этом предметное стекло покачивают. Важно четко соблюдать указанное время обесцвечивания, поскольку при увеличении его продолжительности наблюдается обесцвечивание и грамположительных бактерий
Фуксин
Препарат промывают водой и накладывают на его поверхность полоску фильтровальной бумаги, пропитанной фуксином Пфейфера, смачивают ее водой и окрашивают в течение 60 секунд.Фильтровальную бумагу с красителем удаляют, препарат промывают водой и осушают чистой фильтровальной бумагой
Готовый препарат
После того, как мазок будет осушен, его можно исследовать на микроскопе
Этот метод окраски является газовым методом исследования в микробиологии. Освоив его, вы откроете для себя мир микроорганизмов!